Porcine Acute Diarree Syndrome Coronavirus (SADS-CoV) is een nieuw ontdekt enterisch pathogeen coronavirus bij varkens dat waterige diarree kan veroorzaken bij pasgeboren biggen en aanzienlijke economische verliezen kan veroorzaken voor de varkensindustrie.Op dit moment is er geen geschikte serologische methode om de effectiviteit van SADS-CoV-infectie en vaccin te evalueren, dus er is een dringende behoefte aan het gebruik van een effectieve enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA) om dit tekort te compenseren.Hier werd een recombinant plasmide dat SADS-CoV spike (S)-eiwit tot expressie bracht, gefuseerd met humaan IgG Fc-domein, geconstrueerd om recombinant baculovirus te produceren en tot expressie gebracht in HEK 293F-cellen.Het S-Fc-eiwit wordt gezuiverd met eiwit G-hars en behoudt de reactiviteit met anti-humaan Fc- en anti-SADS-CoV-antilichamen.Vervolgens werd S-Fc-eiwit gebruikt om indirecte ELISA (S-iELISA) te ontwikkelen en de reactieomstandigheden van S-iELISA te optimaliseren.Als resultaat werd door analyse van de OD450nm-waarde van 40 SADS-CoV-negatieve sera, bevestigd door immunofluorescentietest (IFA) en Western-blotting, vastgesteld dat de grenswaarde 0,3711 was.De variatiecoëfficiënt (CV) van de 6 SADS-CoV-positieve sera binnen en tussen runs van S-iELISA waren allemaal minder dan 10%.De kruisreactiviteitstest toonde aan dat S-iELISA geen kruisreactiviteit heeft met andere varkensvirussera.Bovendien was, op basis van de detectie van 111 klinische serummonsters, het totale toevalspercentage van IFA en S-iELISA 97,3%.De virusneutralisatietest met 7 verschillende OD450nm-waarden van serum toonde aan dat de door S-iELISA gedetecteerde OD450nm-waarde positief gecorreleerd was met de virusneutralisatietest.Ten slotte werd S-iELISA uitgevoerd op 300 serummonsters van varkensbedrijven.Commerciële kits van andere varkens-enterovirussen toonden aan dat de IgG-positieve percentages van SADS-CoV, TGEV, PDCoV en PEDV respectievelijk 81,7%, 54% en 65,3% waren., 6%, respectievelijk.De resultaten laten zien dat de S-iELISA specifiek, gevoelig en reproduceerbaar is en kan worden gebruikt om SADS-CoV-infectie in de varkensindustrie te detecteren.Dit artikel is auteursrechtelijk beschermd.alle rechten voorbehouden.
Posttijd: 22 juni-2021